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详细介绍： 文件下载       大鼠II型前胶原C端肽（PIICP）ELISA试剂盒  （用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）   原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠PIICP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 PIICP与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠PIICP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，PIICP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PIICP浓度。 试剂盒组成（2-8℃保存） 酶标板（Coated Wells） 96孔 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） 12ml 10×标本稀释液（Sample Buffer） 12ml 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） 50ml 标准品（Standards）：400ng/ml 1瓶 底物工作液（TMB Solution） 12ml *抗体工作液（Biotinylated Antibody） 12ml 终止液（Stop Solution） 12ml 准备试剂与收集血样 1.          收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。 2.          标准品液配制：设标准管7管，每管加入标本稀释液300ul。在*管中加入400ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出300ul弃去。第七管为空白对照。加上原液管总共八管。 3.          10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。 4.         洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水） 检测程序 1.          加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。 2.          洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。 3.          每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。 4.          洗板：同前。 5.          每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。 6.          洗板：同前。 7.          每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。 8.          每孔加入100ul终止液混匀。 9.          30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 结果计算与判断 1.          所有OD值都应减除空白值后再行计算。 2.          以标准品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。 3.          根据样品OD值在该曲线图上查出相应PIICP含量。 试剂盒性能              1.   灵敏度：zui小的PIICP 检测浓度小于3ng/ml。 2.        特异性：可同时检测重组或天然的大鼠PIICP。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。 3.        重复性：板内、板见变异系数均小于10％。 注意事项              1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。  2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。              3.   板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。              4.   本试剂盒宜置4oC冰箱保存。  5.   本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！