大鼠血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒 （用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内） 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 PAF 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 PAF与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠PAF，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，PAF浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PAF浓度。 试剂盒组成（2-8℃保存） | 酶标板（Coated Wells） | 96孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml | | 10×标本稀释液（Sample Buffer） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml | | 标准品（Standards）：1000mU/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml | | *抗体工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 终止液（Stop Solution） | 12ml | 准备试剂与收集血样 1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。血清测定前用标本稀释液至少作1：10稀释（取20ul，加标本稀释液180ul,稀释10倍）。 2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成1000mU/ml的溶液。设标准管8管，*管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在*管中加入1000mU/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。 3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。 4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水） 检测程序 1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。 2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。 3. 每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。 4. 洗板：同前。 5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。 6. 洗板：同前。 7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。 8. 每孔加入100ul终止液混匀。 9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 结果计算与判断 1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。 2. 以标准品100、50、25、12.5、6.25、3.1、1.56、0 mU/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。 3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应PAF含量，再乘上稀释倍数即可。 试剂盒性能 1. 灵敏度：zui小的PAF 检测浓度小于1mU/ml。 2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠PAF。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。 3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10.6％。 注意事项 1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。 2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！ |
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