小鼠Toll样受体-2（TLR-2）ELISA试剂盒说明书

小鼠Toll样受体-2（TLR-2）ELISA试剂盒 （用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗小鼠TLR-2 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 TLR-2与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠TLR-2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液，在450nm处测OD值，TLR-2浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TLR-2浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（Coated Wells）96孔酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）12ml10×标本稀释液（Sample Buffer）12ml20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）50ml标准品（Standards）：40ng/瓶2瓶底物工作液（TMB Solution）12ml*抗体工作液（Biotinylated Antibody）12ml终止液（Stop Solution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆作1：2稀释（取100ul，加标本稀释液100ul,稀释2倍）。细胞培养上清可以不做稀释直接检测。2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，*管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在*管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应TLR-2含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能 1. 灵敏度：zui小的TLR-2 检测浓度小于40pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的小鼠TLR-2。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于12％。注意事项 1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。 2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！