小鼠IgG定量EIA试剂盒使用说明说明书

小鼠IgG定量EIA试剂盒使用说明

 

原理

本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗小鼠IgG单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IgG与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液，颜色变黄，在450nm处测OD值，IgG浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IgG浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
坐标纸	一张	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：3.2ug/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
封板纸	一张	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1.          收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、尿液等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。尿液测定前用蒸馏水作1：100稀释（取10ul，加标本稀释液990ul,稀释100倍）。血清或血浆至少1：10-50万倍稀释。

2.          标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成6400ng/ml的溶液。取8个1.5ml离心管，*管加蒸馏水900ul，第二至第八管加入蒸馏水500ul。在*管中加入6400ng/ml的标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。

3.         洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1.          加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃30分钟。

2.          洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。。

3.          每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。

6.          每孔加入100ul终止液混匀。

7.          30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1.          所有OD值都应减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2.          以标准品640、320、160、80、40、20、10、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，使用软件作图，画出标准曲线。

3.          根据样品OD值计算出相应IgG含量，再乘上稀释倍数即可。软件可以向本公司邮件索取。

试剂盒性能

             1.   灵敏度：zui小的IgG 检测浓度小于6ng/ml。

2.        特异性：可同时检测重组或天然的小鼠IgG。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。

3.        重复性：板内、板见变异系数均小于10％。

注意事项

             1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

 2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。

             3.   检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

             4.   试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

             5.   说明书中试剂盒组成为96T的量，48T的量应减半！

 6.   本试剂盒宜置4^oC冰箱保存。仅用于科研，不能用于临床诊断！